Identificação de leveduras, Slides de Microbiologia Farmacêutica

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Identificação de

Leveduras

CANDIDA E CRYPTOCUS

Introdução

Leveduras são organismos unicelulares de brotamento e não produzem micélios. As colônias são geralmente visíveis nas placas entre 24 e 48 horas. Suas colônias macias, úmidas, se assemelham a culturas bacterianas mas elas nao sao brilhantes. Há várias espécies de leveduras que podem ser patogênicas para os humanos. Neste trabalho irei abordar apenas as espécies de maior importância medica.

Prova da filamentação Esta prova permite fazer uma identificação presuntiva de C. albicans; acontece que a levedura incubada em soro (humano/ bovino fetal) que é um meio específico e a 37ºC (porque ela resiste à temperatura) durante 2 horas e meia vai formar tubos germinativos que é o início de uma hifa verdadeira e que não apresenta contrição no seu ponto de origem.

Como fazer a filamentacao

 A partir de uma ansa da colônia isolada, fazer uma suspensão em tubo de ensaio contendo 0,5 ml de soro Bovino ou humano.  (^) Incubar a 37ºC durante período máximo de 3 horas. Este prazo é importante porque, após esse período, outras espécies de Candida e de outros gêneros, formam também tubo germinativo. Depositar então, uma gota da suspensão sobre lâmina, cobrir com lamínula e examinar ao microscópio óptico. A presença de tubo germinativo, na forma de pequeno filamento que brota do blastoconídio, sem formar constricção com a célula-mãe, permite a identificação presuntiva de Candida albicans

Identificação de candida

Meio de CHROMAGAR – este meio permite distinguir várias espécies de Candidas e outras leveduras como o Cryptococcus; tem a particularidade de ter uma mistura de substractos cromogéneos, cada um deles dirigido a um sistema enzimático específico de cada espécie.

Leitura em chromagar

 (^) C.albicans -verde  (^) C.glabrata -Rosa/roxo  (^) C.tropicalis Azul  (^) S. cerevisiae Roxo  (^) C. neoformams Crème sujo

Cont.

A cor nem sempre é nítida e o congelamento pode levar à perda da difusão da coloração ; usa-se apenas em Candidas, uma vez que há outras bactérias que reduzem o sulfito de bismuto (S. cerevisiae por exemplo) o que nos podia enganar... Na imagem ao lado temos uma C. albicans num meio de BIGGY comercial com a coloração típica escura (não quer dizer que seja igual ao da aula!, aliás até há muitas diferenças…é só pa ter ideia

Identificação de cryptococus

A identificacao de cryptococus pode ser feita atraves  Exame directo Tinta de China  Gram  Cultura e provas Bioquimicas  Tecnicas Moleculares

Tinta de china

 Utilizada em amostras de líquor, urina, secreções ou exsudatos, para visualização de leveduras  capsuladas do gênero Cryptococcus , que se tornam mais evidentes contra o fundo negro  (^) proporcionado pela tinta.  Colocar uma gota de tinta nanquim e uma gota do sedimento da amostra centrifugada, sobre uma

Tinta de China

Cultura As amostras clínicas são semeadas em ágar Sabouraud e em outro meio diferencial que pode ser ágar semente de Niger (alpiste), semente de girassol,gar dopamina, ágar L-dopa ou ágar batata cenoura e outros meios de cultura. Apois o crescimento das colonias nestes meios se faz provas bioquímicas.

Prova de urease

 (^) prova de urease, disponível em todo laboratório de microbiologia é muito utilizada em micologia.  A reação positiva para urease, junto com análise morfológica permite identificação presuntiva de  Cryptococcus sp. Leveduras do gênero Rhodotorula são também urease positiva mas, como em regra, apresentam colônias com pigmento avermelhado ou salmão, são facilmente distinguidas de  Cryptococcus sp. Outros gêneros incluindo Candida sp, produzem urease, mas tem outras características para sua identificação.

Prova de urease