A2 Replic DNA, Notas de estudo de Educação Física

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Replicação do dnaReplicação do dna

Disciplina: Genética

Profa. Dra. Joseane

Scavroni

A replicação do DNA é ... Experimento realizado por Meselson & Stahl em 1958 Cultivo em meio (^14) NH 4 Cl Cultivo em meio (^15) NH 4 Cl Purificação do DNA seguida de centrifugação em gradiente de CsCl

REPLICAÇÃO

• FITA MOLDE , FITA COMPLEMENTAR

(semi-conservativa)

• SEMI-DESCONTÍNUA (fragmentos de

Okazaki)

• ENZIMAS - DNA POLIMERASE, helicases,

topoisomerases, primases, ligases,

SSBP

Replicon: Unidade do DNA onde está ocorrendo um evento de replicação Replicon:

**1. Origem + Término

2. Ativados apenas uma única vez em cada ciclo celular
3. O genoma de uma célula procariótica constitui um único** **replicon
4. Cada cromossomo eucariótico**  vários replicons e todos são ativados uma única vez no ciclo celular ainda que não simultaneamente

A replicação é bidirecional

A replicação semi-

conservativa se dá a

partir de forquilhas de

replicação

Auto-radiografias obtidas com [ 3 H]timidina revelam a estrutura  (olho de replicação) Diferenciação auto- radiográfica da replicação unidirecional e bidirecional do DNA

Após marcação fraca com

[

3

H]timidina, uma suspensão

de E. coli recebe um pulso de

grande quantidade de

[

3

H]timidina. Alguns

segundos após isola-se o

DNA para fazer

autorradiografia. Espera-se

padrões diferentes para cada

tipo de replicação

síntese descontínua síntese contínua Fita lagging Fita leading

helicase topoisomerase Quebra de pontes de hidrgênio Relaxa o superenrrolamento Fragmentos de Okasaki

Todas as DNA polimerases precisam de um grupo 3'-OH para estender a cadeia de DNA Como, então, se inicia a síntese de DNA? Uma enzima chamada primase (insensível à rifampicina) sintetiza um PRIMER de RNA tanto na fita lider como nos fragmentos de Uma RNA polimerase pode sintetizar também um primer da fita líder

A replicação do cromossomo circular

PROTEÍNA FUNÇÃO DNA girase Desespiraliza o DNA SSB Ligação e estabilização da fita simples do DNA DnaA (^) Fator de iniciação HU Ligação e estabilização do DNA (semelhante a histonas) PriA Montagem do primosso, 3'  5' helicase PriB Montagem do primossomo PriC Montagem do primossomo DnaB 3'  5' helicase (desespiraliza o DNA) DnaC Chaperona DnaB DnaT Auxilia o DnaC na liberação do DnaB Primase (iniciase) Síntese do primer de RNA DNA polimerase III Elongação (síntese propriamente dita do DNA) DNA polimerase I Elimina o primer de RNA, preenchendo com DNA DNA ligase Liga covalentemente os fragmentos de Okazaki Ter Término

SUB- UNIDADE NÚMERO MASSA (kd) FUNÇÃO  2 37 Incerta  1 151 Forma ligações fosfodiester  ' 1 155 Liga o molde de DNA  1 50 Reconhece o promotor e inicia a síntese

A enzima de E. coli é complexa (

kd)

Ela executa várias funções:

1. Procura por sítios de iniciação (sítios promotores) no DNA

2. Desespiraliza um curto trecho da dupla hélice do DNA para

liberar um molde de fita única

3. Seleciona o ribonucleosídeo fosfato correto e catalisa a formação

de uma ligação fosfodiester; este processo é repetido muitas

vezes à medida que a enzima se move ao longo do DNA

4. Detecta sinais de terminação

5. Interage com ativadores e repressores que modulam a

velocidade da transcrição

TRANSCRIÇÃOTRANSCRIÇÃO